Numărul total de microbi din apa potabilă. Studii microbiologice ale apei. Analiza microbiologică standard
Cu această metodă de analiză a apei, o anumită cantitate de apă este trecută printr-o membrană specială cu o dimensiune a porilor de aproximativ 0,45 microni. Ca urmare, toate bacteriile din apă rămân pe suprafața membranei. După care membrana cu bacterii se pune un anumit timp într-un mediu nutritiv special la o temperatură de 30-37 oC. În această perioadă, numită incubație, bacteriile sunt capabile să se înmulțească și să formeze colonii clar vizibile care pot fi ușor numărate. Ca rezultat, puteți vedea ceva de genul acesta: Sau chiar această imagine:  Deoarece această metodă de analiză a apei implică doar determinarea numărului total de colonii - formând bacterii de diferite tipuri, rezultatele ei nu pot judeca clar prezența microbilor patogeni în apă. Cu toate acestea, un număr mare de microbi indică o contaminare bacteriologică generală a apei și o probabilitate mare de prezență a organismelor patogene. |
La analiza apei, este necesar să se controleze nu numai conținutul de substanțe chimice toxice, ci și numărul de microorganisme care caracterizează contaminarea bacteriologică a apei potabile TMC - numărul total de microbi în apa de alimentare cu apă centralizată, acest număr nu trebuie să depășească 50 CFU /ml, iar în godeuri și godeuri - nu mai mult de 100 CFU/ml
Testarea sanitară și microbiologică a apei se efectuează conform planului
ordin în scopul supravegherii continue, precum și în scopuri epidemiologice speciale
kim indicaţii. Obiectele principale ale unei astfel de cercetări sunt:
— apă potabilă de la alimentarea centrală cu apă (apă de la robinet);
— apă potabilă din alimentarea cu apă necentralizată;
— apă din surse de apă de suprafață și subterane;
- ape uzate;
— apa zonelor de coastă ale mărilor;
- apa piscinei.
Principalii indicatori pentru evaluarea stării microbiologice a apei potabile conform documentelor de reglementare în vigoare sunt:
1. Numărul microbian total (TMC) - numărul de bacterii mezofile în 1 ml de apă.
Dacă titrul- cel mai mic volum de apă (în ml) în care a fost găsit cel puțin un organism viu
celula microbiană înrudită cu coliformii.
Indexul de coliformi- cantitatea de coliformi in 1 litru de apa.
3. Numărul de spori de clostridii sulfito-reducătoare în 20 ml apă.
4. Numărul de colifage în 100 ml apă.
Determinarea TMC permite evaluarea nivelului de contaminare microbiologică a apei potabile. Acest indicator este indispensabil pentru detectarea urgentă a contaminării microbiene masive.
Numărul total de microbi este numărul de microorganisme aerobe mezofile și anaerobe facultative capabile să formeze colonii pe agar nutritiv la o temperatură de 37 °C timp de 24 de ore, vizibile la mărire dublă.
La determinarea numărului microbian total, se adaugă 1 ml de apă de testare într-o cutie Petri sterilă și se toarnă 10-12 ml de agar nutritiv topit cald (44 ° C). Mediul se amestecă cu grijă cu apă, uniform și
fara bule de aer, se intinde pe fundul cupei, apoi se acopera cu un capac si se lasa pana se intareste. Culturile sunt incubate într-un termostat la 37 °C timp de 24 de ore. Se numără numărul total de colonii crescute în ambele vase și se determină media. Rezultatul final este exprimat prin numărul de unități formatoare de colonii (CFU) în 1 ml de apă de testare. 1 ml de apă de băut nu trebuie să conțină mai mult de 50 CFU
Definiţia coliforms
În același timp, sunt determinate bacteriile coliforme comune (TCB) și bacteriile coliforme termotolerante (TCB).
OKB sunt baghete gram-negative, care nu formează spori, care fermentează lactoza la acid și gaz la o temperatură de 37°C timp de 24-48 de ore. TKB sunt incluse în grupul OKB, au simptomele lor, dar fermentez la 44°C Pentru a determina enterobacterii, folosesc metoda filtrului cu membrană sau titrare.
Numărul microbian este principalul criteriu de evaluare a stării microbiologice a apei potabile, pe baza documentelor de reglementare actuale, este TMC (numărul microbian total), care caracterizează numărul de bacterii aerobe și anaerobe într-un mililitru de apă, formate pe zi la o temperatură de 37 de grade, într-un mediu nutritiv.
Indicatori de calitate ai apei potabile în sistemele de alimentare cu apă.
Acest indicator este practic indispensabil pentru detectarea rapidă a contaminării microbiene masive.
Pentru determinarea numărului microbian total se adaugă un mililitru de apă de testare într-un vas Petri steril, apoi se toarnă 10-15 ml de agar nutritiv topit cald (aproximativ 44 ° C). Mediul se amestecă cu grijă cu apă, se distribuie uniform și fără bule de aer pe fundul vasului, apoi se închide cu un capac și se lasă în vasul Petri până se întărește. Același lucru se face într-o altă cană. Inoculările sunt incubate într-un termostat la o temperatură de 37 °C timp de 24 de ore. Numărul total de colonii crescute în cele două vase este apoi numărat la microscop la o mărire de 2x și se determină media. Nu trebuie să fie mai mult de 50 CFU în 1 ml de apă de băut.
(metoda principala)
Metoda se bazează pe filtrarea unui anumit volum de apă (300 ml) prin filtre cu membrană, cultivarea culturilor pe mediu de diagnostic diferențial cu lactoză (Endo) și identificarea ulterioară a coloniilor după caracteristicile culturale și biochimice.
Filtrele cu membrană pregătite pentru analiză (fierte sau sterilizate în alt mod) sunt plasate cu pensete sterile în pâlnia aparatului de filtrare. Un volum măsurat de apă este turnat în pâlnia dispozitivului și se creează un vid. După filtrare, filtrul este îndepărtat și, fără să se răstoarne, se așează pe suprafața mediului nutritiv Endo.
Puteți pune 3 filtre pe o cană. La studierea apei de băut, se filtrează 3 volume de 100 ml. la analizarea apei de calitate necunoscuta se recomanda filtrarea altor volume de apa pentru a obtine colonii izolate pe filtru (10,40, 100 si 150 ml).
Vasele cu filtre sunt incubate cu capul în jos într-un termostat la 37°C timp de 24 de ore.
Dacă nu există o creștere pe filtre sau dacă au crescut colonii atipice peliculoase, mucegaioase sau difuze, se dă un rezultat negativ. TCB și TCB sunt absente în 100 ml de apă testată.
Când coloniile tipice izolate cu lactoză pozitive (roșu închis cu amprente pe spatele filtrului) cresc pe filtre, numărul lor este numărat și încep să confirme apartenența lor la OKB și TKB.
Se efectuează microscopia frotiurilor din 3-4 colonii colorate cu Gram (se iau în considerare cele gram-negative);
Se determină prezența oxidazei (se iau în considerare cele oxidaze negative, deoarece baghetele gram negative oxidaze pozitive nu aparțin enterobacteriilor, ci pot fi, de exemplu, pseudomonade);
Fermentarea lactozei la acid și gaz este determinată la o temperatură de 37 ° C, ceea ce este important pentru coloniile slab colorate și relația lor cu TCB, și o temperatură de 44 ± 0,5 ° C, pentru a rezolva problema apartenenței lor. la TCB.
Efectuarea unui test de oxidază
O parte din colonia colorată este aplicată pe hârtie umezită cu o soluție de alcool 1% de α-naftol și o soluție apoasă 1% de dimetilfenilendiamină. reacția este considerată pozitivă dacă în decurs de 1 minut, maxim 4 minute apare o culoare albastră sau violetă. Coloniile oxidază-pozitive nu sunt numărate și nu sunt supuse examinării ulterioare.
Puteți transfera filtrul cu colonii pe hârtie umezită cu reactiv. Puteți utiliza sisteme de hârtie gata preparate (SIB) umezite cu apă distilată.
Părți din colonii de bacterii gram-negative oxidază-negative sunt testate pentru capacitatea de a fermenta lactoza. Acesta folosește un mediu semi-lichid cu lactoză și un indicator de pH. Semănatul se face prin injectarea a 2 eprubete pe fund. Unul este incubat la o temperatură de 37±1oC timp de 24-48 ore pentru a confirma relația cu TKB, celălalt la o temperatură de 44±0,5oC timp de 24 de ore, numărarea este posibilă după 4-6 ore pentru a confirma prezența TKB .
Când coloniile sunt plasate pe filtru, acestea sunt cernute, apoi sunt identificate coloniile izolate rezultate. Coloniile sunt numărate ca OKB - dacă sunt roșii pe Endo, ele conțin baghete gram-negative oxidaze-negative care descompun lactoza la o temperatură de 37 oC în acid și gaz. Coloniile sunt considerate ca TKB dacă conțin baghete gram-negative oxidază-negative care fermentează lactoza la o temperatură de 44 oC la acid și gaz (schema nr. 2).
SCHEMA Nr 2
Data publicării: 2014-11-02; Citește: 1811 | Încălcarea drepturilor de autor ale paginii
studopedia.org - Studopedia.Org - 2014-2018 (0,001 s)...
Numărul total de microbi
| Cu această metodă de analiză a apei, o anumită cantitate de apă este trecută printr-o membrană specială cu o dimensiune a porilor de aproximativ 0,45 microni. Ca urmare, toate bacteriile din apă rămân pe suprafața membranei. După care membrana cu bacterii se pune un anumit timp într-un mediu nutritiv special la o temperatură de 30-37 oC. În această perioadă, numită incubație, bacteriile sunt capabile să se înmulțească și să formeze colonii clar vizibile care pot fi ușor numărate. Ca rezultat, puteți vedea ceva de genul acesta: Sau chiar această imagine: Deoarece această metodă de analiză a apei implică doar determinarea numărului total de colonii - formând bacterii de diferite tipuri, rezultatele ei nu pot judeca clar prezența microbilor patogeni în apă. Cu toate acestea, un număr mare de microbi indică o contaminare bacteriologică generală a apei și o probabilitate mare de prezență a organismelor patogene. |
La analiza apei, este necesar să se controleze nu numai conținutul de substanțe chimice toxice, ci și numărul de microorganisme care caracterizează contaminarea bacteriologică a apei potabile TMC - numărul total de microbi în apa de alimentare cu apă centralizată, acest număr nu trebuie să depășească 50 CFU /ml, iar în godeuri și godeuri - nu mai mult de 100 CFU/ml
Testarea sanitară și microbiologică a apei se efectuează conform planului
ordin în scopul supravegherii continue, precum și în scopuri epidemiologice speciale
kim indicaţii. Obiectele principale ale unei astfel de cercetări sunt:
— apă potabilă de la alimentarea centrală cu apă (apă de la robinet);
— apă potabilă din alimentarea cu apă necentralizată;
— apă din surse de apă de suprafață și subterane;
- ape uzate;
— apa zonelor de coastă ale mărilor;
- apa piscinei.
Principalii indicatori pentru evaluarea stării microbiologice a apei potabile conform documentelor de reglementare în vigoare sunt:
1. Numărul microbian total (TMC) - numărul de bacterii mezofile în 1 ml de apă.
Dacă titrul- cel mai mic volum de apă (în ml) în care a fost găsit cel puțin un organism viu
celula microbiană înrudită cu coliformii.
Indexul de coliformi- cantitatea de coliformi in 1 litru de apa.
3. Numărul de spori de clostridii sulfito-reducătoare în 20 ml apă.
4. Numărul de colifage în 100 ml apă.
Determinarea TMC permite evaluarea nivelului de contaminare microbiologică a apei potabile. Acest indicator este indispensabil pentru detectarea urgentă a contaminării microbiene masive.
Numărul total de microbi este numărul de microorganisme aerobe mezofile și anaerobe facultative capabile să formeze colonii pe agar nutritiv la o temperatură de 37 °C timp de 24 de ore, vizibile la mărire dublă.
La determinarea numărului microbian total, se adaugă 1 ml de apă de testare într-o cutie Petri sterilă și se toarnă 10-12 ml de agar nutritiv topit cald (44 ° C). Mediul se amestecă cu grijă cu apă, uniform și
fara bule de aer, se intinde pe fundul cupei, apoi se acopera cu un capac si se lasa pana se intareste. Culturile sunt incubate într-un termostat la 37 °C timp de 24 de ore. Se numără numărul total de colonii crescute în ambele vase și se determină media. Rezultatul final este exprimat prin numărul de unități formatoare de colonii (CFU) în 1 ml de apă de testare. 1 ml de apă de băut nu trebuie să conțină mai mult de 50 CFU
Definiţia coliforms
În același timp, sunt determinate bacteriile coliforme comune (TCB) și bacteriile coliforme termotolerante (TCB).
OKB sunt baghete gram-negative, care nu formează spori, care fermentează lactoza la acid și gaz la o temperatură de 37°C timp de 24-48 de ore. TKB sunt incluse în grupul OKB, au simptomele lor, dar fermentez la 44°C Pentru a determina enterobacterii, folosesc metoda filtrului cu membrană sau titrare.
Numărul microbian este principalul criteriu de evaluare a stării microbiologice a apei potabile, pe baza documentelor de reglementare actuale, este TMC (numărul microbian total), care caracterizează numărul de bacterii aerobe și anaerobe într-un mililitru de apă, formate pe zi la o temperatură de 37 de grade, într-un mediu nutritiv. Acest indicator este practic indispensabil pentru detectarea rapidă a contaminării microbiene masive.
Pentru determinarea numărului microbian total se adaugă un mililitru de apă de testare într-un vas Petri steril, apoi se toarnă 10-15 ml de agar nutritiv topit cald (aproximativ 44 ° C). Mediul se amestecă cu grijă cu apă, se distribuie uniform și fără bule de aer pe fundul vasului, apoi se închide cu un capac și se lasă în vasul Petri până se întărește.
Principiile raționalizării apei potabile
Același lucru se face într-o altă cană. Inoculările sunt incubate într-un termostat la o temperatură de 37 °C timp de 24 de ore. Numărul total de colonii crescute în cele două vase este apoi numărat la microscop la o mărire de 2x și se determină media. Nu trebuie să fie mai mult de 50 CFU în 1 ml de apă de băut.
Scopul lucrării: studiul metodelor de evaluare a stării sanitare și bacteriologice a apei potabile și a apei din rezervoare naturale.
Apa utilizată în întreprinderile din industria alimentară trebuie să îndeplinească cerințele privind apa potabilă din documentele de reglementare actuale. Siguranța apei din punct de vedere epidemiologic este determinată de numărul total de microorganisme și numărul de bacterii coliforme dintr-un anumit volum.
Calitatea apei din sistemele centralizate de alimentare cu apă potabilă este determinată în conformitate cu normele și reglementările sanitare. Apa potabilă trebuie să fie sigură din punct de vedere epidemiologic și al radiațiilor, sigură în compoziția chimică și să aibă proprietăți organoleptice favorabile (Tabelul 12.1).
Indicatori
* PFU - unități formatoare de plăci.
12.1. Eșantionarea și pregătirea lor pentru analiză
Apa pentru control sanitar si bacteriologic se ia in cantitate de 500 cm 3 in sticle, presterilizate in pungi de hartie, cu dop de tifon de bumbac acoperit cu capac de hartie.
Înainte de prelevare, robinetul sau marginea țevii este ars cu un tampon de bumbac aprins înmuiat în alcool. Deschideți robinetul și scurgeți apa timp de 10-15 minute, apoi luați o probă. Apa trebuie analizată nu mai târziu de 2 ore de la prelevare.
Probele de apă din rezervoare deschise - fântâni, piscine, râuri, lacuri - sunt prelevate cu ajutorul batometrelor, care sunt un cadru metalic cu un fund masiv de plumb - o chiuvetă. O sticlă este introdusă în cadrul metalic. Sticleimetrul este scufundat la o adâncime predeterminată și sticla este deschisă trăgând de o frânghie legată de dopul. După umplerea sticlei, sticla se scoate și se închide cu un dop steril.
Probele de apă clorurată sunt luate în sticle cu un declorinator, deoarece microbii din apă mor sub influența clorului. Sulfura de sodiu este utilizată ca declorinator la o rată de 10 mg la 500 cm3 de apă testată.
Un document de însoțire care indică datele relevante este atașat probelor de apă colectate. Probele de apă potabilă sunt livrate în recipiente frigorifice la o temperatură de 4 până la 10 °C.
12.2. Determinarea numărului microbian total al apei
Numărul total de microbi (TMC) - acesta este numărul de microorganisme aerobe mezofile și anaerobe facultative care formează colonii pe agar peptonă de carne atunci când se inoculează 1 cm 3 de apă cu incubarea ulterioară a culturilor la o temperatură de 37 ± 0,5 ° C timp de 48 de ore peste 50 CFU/cm3.
În funcție de gradul de contaminare suspectată, se inoculează cel puțin două volume diferite de apă, selectate astfel încât pe vase să crească de la 30 la 300 de colonii. Apa de la robinet și apa arteziană se seamănă nediluată la 1 cm3. În timpul examinării bacteriologice a apelor contaminate se fac culturi de apă diluată. Diluțiile sunt preparate așa cum este descris în secțiunea 8.3.
Din proba de testat și din eprubete cu diluțiile sale, în conformitate cu gradul de contaminare microbiană așteptată, se ia 1 cm 3, se adaugă în vase Petri sterile și se toarnă în 10-12 cm de lichid topit și se răcește la o temperatură de 45 °. C carne peptonă agar. Folosind mișcări circulare ale mâinii, rotind cupele de-a lungul suprafeței orizontale a mesei, distribuiți conținutul acestora într-un strat uniform pe întreaga zonă de jos. După ce agarul s-a întărit, plăcile cu inoculările sunt plasate într-un termostat la 37 °C timp de 24 de ore. După incubare, se numără numărul de colonii crescute.
Determinarea numărului microbian prin această metodă ne permite să identificăm doar microorganismele mezofile aerobe și anaerobe facultative.
12.3. Determinarea bacteriilor coliforme în apă
Din punct de vedere epidemiologic, este deosebit de importantă detectarea microorganismelor patogene în apă - agenți cauzatori ai infecțiilor intestinale (febră tifoidă, dizenterie, holeră etc., datorită dificultății mari de a detecta microorganismele patogene în timpul analizelor bacteriologice). sunt limitate la definirea așa-numitelor microorganisme indicative sanitare (SIM) . Indicatorii sanitari includ microorganisme care sunt prezente constant în cavitățile naturale ale oamenilor sau animalelor. Prezența SPM în diferite obiecte din mediu este un indicator al contaminării acestora de către oameni. Cu cât mai mult SPM în mediul extern, cu atât este mai probabilă prezența agenților patogeni specifici ai bolilor infecțioase.
Bacteriile Escherichia coli (coliforme) sunt de cea mai mare importanță ca SPM. Grupul Escherichia coli include bacterii coliforme din genuri Escherichia, Enterobacter, Citrobacter, Klebsiella, Serratia.
La determinarea cantității de SPM în apă, se folosesc următoarele caracteristici:
. coli-titru - cel mai mic volum de apă în care se găsește o E. coli. Pentru apa potabilă care a suferit epurare, titrul de E. coli trebuie să fie de cel puțin 300 cm 3;
. coli-index - numărul de E. coli în 1 dm3 de apă. Indicele coli pentru apa potabilă nu trebuie să fie mai mare de 3.
Bacteriile coliforme sunt determinate în apă folosind metoda filtrului cu membrană sau metoda fermentației.
Metoda de fermentare. Esența metodei de fermentație este inocularea anumitor volume de apă de testare, incubarea
culturi la temperatura de 37 °C în medii de acumulare, urmată de însămânțare pe mediu Endo, diferențierea coloniilor crescute și determinarea numărului cel mai probabil de coliformi în 1 dm 3 de apă.
La studierea apei dintr-o alimentare centralizată cu apă, materialul studiat este inoculat de două ori în trei volume: 100, 10 și 1 cm3. Pentru a studia apa de râu, lac și iaz, se prepară diluții de zece ori de 1:10, 1:100, 1:1000 și se inoculează alți 10 cm3 și 1 cm3 fără diluare. Apa este inoculată în vase de fermentație (baloane, sticle, eprubete cu flotoare) umplute cu mediu glucoză-peptonă Eijkman. Culturile sunt incubate într-un termostat la 37 °C timp de 24 de ore.
a) în absența formării de gaze și a modificărilor de culoare a mediului, dați un răspuns negativ la prezența coliformilor în volumul de apă testat, dând dreptul de a finaliza studiul după 24 de ore;
b) când se formează acid și gaz, materialul este însămânțat din vasele de fermentație pe mediul Endo. Semănarea se face cu ansă bacteriologică în cursă groasă pentru a obține colonii izolate. Vasele cu inoculările sunt incubate la 37 °C timp de 24 de ore. După incubare, inoculările sunt examinate. Absența coloniilor caracteristice E. coli pe mediul Endo dă motive pentru emiterea unui răspuns negativ și încheierea studiului;
c) în cazul în care pe mediul Endo sunt detectate colonii roșu închis lactoză pozitive, cu sau fără strălucire metalică, este necesar să se stabilească dacă microorganismele crescute aparțin familiei bacteriilor intestinale. În acest scop, se efectuează o microscopie a probei din colonii și se efectuează un test de oxidază.
Testul oxidazei a propus să diferențieze bacteriile din familia Enterobacteriaceae de bacteriile gram-negative din familia Pseudomonodaceae și alte saprofite acvatice, care, spre deosebire de bacteriile intestinale, produc enzima oxidază.
Pentru a efectua un test de oxidază, 2-3 colonii de fiecare tip sunt îndepărtate din mediul Endo cu o buclă. Masa microbiană se strecoară pe hârtie de filtru umezită cu un reactiv special (se dizolvă 30 g de α-d-naftol în 2,5 cm 3 de etanol, 7,5 cm 3 de apă distilată și se adaugă 40 mg de dimetil-parafenilendiamină. Soluția este pregătit imediat înainte de determinare).
Dacă rezultatul testului de oxidază este negativ, hârtia nu își schimbă culoarea la contactul cu colonia. Dacă hârtia devine albastră în decurs de 1 minut la contactul cu colonia, atunci testul oxidazei este considerat pozitiv.
Prezența în prepararea baghetelor gram-negative neformatoare de spori care nu au activitate oxidazică face posibil să se dea imediat un răspuns despre prezența bacteriilor coliforme în apă.
Dacă pe mediul Endo sunt detectate colonii roz și incolore, numărați și subcultivați 2-3 colonii izolate de fiecare tip în mediul glucoză-peptonă Eijkman. Culturile sunt incubate la o temperatură de 37 °C timp de 3-4 ore Dacă se formează acid (schimbarea culorii mediului) și se acumulează gaz în flotor, rezultatul este considerat pozitiv în absența formării de acid și gaz , rezultatul este considerat negativ.
După analiză, rezultatele finale (pozitive și negative) pentru fiecare volum inoculat sunt înregistrate în jurnalul de laborator și se determină titrul coli și indicele coli.
Metoda filtrului cu membrană. Esența metodei este concentrarea bacteriilor dintr-un anumit volum de apă pe filtre cu membrană, urmată de creșterea lor în mediu Endo la o temperatură de 37 ° C, diferențierea coloniilor crescute și numărarea cantității de coliformi în 1 cm 3 de apă. .
Pregătirea filtrelor cu membrană. Pentru a filtra apa, selectați filtrele cu membrană nr. 3, puneți-le în apă distilată încălzită la o temperatură de 80 ° C și puneți-le pe foc mic la fiert. Se fierbe de trei ori timp de 10 minute. După prima și a doua fierbere, apa se scurge, iar după a treia, filtrele se lasă în apă până la utilizare.
Pregătirea aparatului de filtrare. Aparatul de filtrare este sterilizat într-o autoclavă sau șters cu un tampon de bumbac înmuiat în alcool și ars pentru sterilizare. Un filtru cu membrană este plasat pe masa aparatului de filtrare folosind pensete sterile. Pentru a preveni deteriorarea filtrului, puneți sub el un cerc de hârtie de filtru sterilă. Partea superioară a dispozitivului - o pâlnie - este instalată și asigurată pe masa de filtrare cu filtrele așezate pe ea (Fig. 12.1).
Orez. 12.1. Determinarea numărului de microorganisme prin metoda filtrului cu membrană
Apa de filtrare și creșterea microorganismelor. Volumul de apă de testat este turnat steril în pâlnia aparatului de filtrare și se creează un vid în vasul de primire folosind o pompă cu jet de apă. La analizarea apei potabile care intră în rețeaua de alimentare cu apă, este necesar să se ia un volum de cel puțin 333 cm3. La sfârșitul filtrării, filtrul cu membrană este transferat cu o pensetă aprinsă pe suprafața mediului nutritiv Endo în vase Petri. În prezent, produc filtre impregnate cu medii nutritive adecvate. Culturile sunt incubate într-un termostat la 37 °C timp de 18-24 ore.
Prelucrarea rezultatelor analizei. La sfârșitul incubației, culturile sunt examinate și se fac următoarele concluzii:
a) absența creșterii microbiene pe filtre sau detectarea pe acestea a coloniilor care nu sunt caracteristice coliformilor permite finalizarea studiului în această etapă a analizei cu rezultat negativ pentru prezența coliformilor în volumul de apă analizat ;
b) dacă pe filtru sunt detectate colonii caracteristice bacteriilor coliforme, studiul se continuă. Frotiurile sunt preparate din mai multe colonii de fiecare tip, colorate cu Gram și examinate la microscop. Absența unor tije mici gram-negative nepurtătoare de spori în frotiuri este baza pentru oprirea analizei cu rezultat negativ pentru prezența bacteriilor coliforme în volumul de apă de testat;
c) dacă în frotiuri există bacili gram-negativi, asemănători morfologic cu bacilii intestinali, se efectuează un test de oxidază. Dacă pe filtrele cu membrană se găsesc colonii lactoză pozitive de același tip (roșu închis cu sau fără strălucire metalică) care nu produc oxidază, analiza apei este finalizată în această etapă și numărul de colonii de E. coli crescute pe se numără filtrul cu membrană. Rezultatul este exprimat ca indice coli în termeni de 1 dm 3 de apă;
d) dacă pe filtrele cu membrană sunt detectate colonii roz și incolore, numărul acestora este numărat și 2-3 colonii izolate de fiecare tip sunt subcultivate în mediu glucoză-peptonă Eijkman. După incubare timp de 3-4 ore la o temperatură de 37 °C, se observă o schimbare a culorii mediului datorită formării acumulării de acid și gaz în flotor. În acest caz, rezultatul este considerat pozitiv. Dacă nu există schimbări în mediu, atunci acestea dau un rezultat negativ pentru prezența bacteriilor coliforme.
Exemplu determinarea indicelui coli: s-au filtrat trei volume de apă de 100 cm3. Trei colonii au crescut pe primul și al doilea filtru, iar nouă colonii au crescut pe al treilea. Au crescut în total cincisprezece colonii. Astfel, indicele coli al probei de apă studiată este egal cu: (1000 x 15): 300 = 50. Indicele coli se transformă în colilitru astfel: 1000: 50 = 20.
Întrebări de control
1. Ce indicatori ai siguranței epidemiologice a apei potabile cunoașteți?
2. Care este numărul total de microbi, colititr și indicele coli?
3. Ce genuri de microorganisme sunt incluse în coliformi?
4. Ce metode se folosesc pentru determinarea bacteriilor coliforme?
5. Care sunt principalele criterii folosite pentru a determina prezența bacteriilor coliforme în apa de băut?
6. Care este scopul testului de oxidază?
Laptele crud este laptele care nu a fost supus unui tratament termic la o temperatură mai mare de 40ºС sau unui tratament în urma căruia părțile sale constitutive sunt modificate.
Laptele crud poate conține microorganisme periculoase care pot provoca boli infecțioase și toxiinfecții alimentare. Laptele crud ocupă primul loc printre alimentele al căror consum este asociat cu riscul de îmbolnăvire gravă.
Tipul de lapte depinde de cantitatea de MAFanM din 1 ml de lapte conform normelor și reglementărilor sanitare (SanPiN 2.3.2.1078-01), laptele crud se împarte în:
- pentru lapte crud, calitate premium - nu mai mult de 300 de mii de bacterii la 1 ml;
- pentru laptele crud, gradul I - nu mai mult de 500 de mii de bacterii la 1 ml;
- pentru laptele crud, gradul II - nu mai mult de 4 milioane de bacterii la 1 ml.
Scopul studiului: studierea nivelului de microorganisme din laptele crud. În acest sens, s-a stabilit sarcina: să se determine nivelul numărului microbian total din lapte și anume KMAFAnM (numărul de microorganisme aerobe mezofile și anaerobe facultative).
Materialul pentru studiu a fost lapte crud luat de la o vacă numită „Snezhinka”, o rasă Simmental situată în spitalul Universității Agrare de Stat din Bashkortostan.
Desen1 . O mostră din laptele testat.
Determinarea QMAFAnM a fost efectuată în conformitate cu actualul GOST R 53430-2009. Metoda se bazează pe capacitatea microorganismelor mezofile aerobe și anaerobe facultative de a se înmulți pe un mediu nutritiv (MMA) la o temperatură de 30±1°C timp de 72 de ore.
Am preparat diluții succesive de zece ori din lapte crud, adică. 1 ml de lapte crud a fost adăugat într-o eprubetă cu 9 ml de apă sterilă pentru a obține prima diluție de 1:10 (10‾¹). Din prima diluție, 1 ml a fost transferat într-o a doua eprubetă cu 9 ml de apă sterilă - a doua diluție a fost 1:100 (10‾²) și așa mai departe până când diluția a fost 10 -5.
Izolarea QMAFAnM din probele de lapte crud a fost realizată prin inocularea ultimelor trei diluții (10 -3, 10 -4, 10 -5) (Tabelul 1).
Masa1 .
Schema culturilor pe medii nutritive
|
Mediu nutritiv |
Microorganisme izolate |
reproduceri |
||||
1 ml din fiecare diluție a fost adăugat într-un vas Petri cu un capac pre-etichetat și 14 ± 1 ml de agar topit răcit la o temperatură de 40-45°C au fost turnați peste acesta. Imediat după turnarea agarului, conținutul vasului Petri a fost amestecat bine prin agitare rotativă ușoară pentru a asigura o distribuție uniformă a inoculului. După ce agarul s-a solidificat, vasele Petri au fost întoarse cu susul în jos și plasate într-un termostat la 30±1°C timp de 72 de ore.
Numărul de colonii crescute a fost numărat în fiecare cană și înmulțit cu puterea (formula 1).
Formula de calcul: X= n*10 m
unde n este numărul de colonii numărate pe o placă Petri;
m este numărul de diluții de zece ori.
Am primit următoarea valoare medie (Tabelul 2).
Masa 2.
Numărul de colonii crescute
Din Tabelul 2 se poate observa că într-o cutie Petri cu o diluție de 10‾ 3 au crescut 21 de colonii, ceea ce corespunde la 21.000 de microorganisme; într-un vas cu o diluție de 10‾ 4 – 13 colonii (130.000), și într-un vas cu o diluție de 10‾ 5 – 6 colonii (600.000). Valoarea medie a celor trei indicatori a fost de 250333 (250.333 mii) microorganisme.
Astfel, numărul total de microbi din lapte, și anume numărul de microorganisme mezofile aerobe și anaerobe facultative din laptele studiat este de 250.333 mii Conform normelor și reglementărilor sanitare (SanPin 2.3.2.1078-01), acest lapte crud poate fi clasificat ca. „cel mai înalt grad”, deoarece QMAFAnM a fost mai puțin de 300 de mii de bacterii în 1 ml.
De asemenea, trebuie menționat că acest lapte crud respectă GOST R 53430-2009, este potrivit pentru consum direct, procesare în produse lactate, îndeplinește cerințele sanitare pentru păstrarea animalelor și igiena producției de lapte.
Bibliografie:
- Gosmanov R.G. Microbiologie sanitară: Manual. – Sankt Petersburg: Editura Lan, 2010. – 240 p.
- Ilyasova Z.Z Instrucțiuni metodologice pentru orele practice C2.B.11 Microbiologie și micologie veterinară: Instrucțiuni metodologice / Z.Z. – Ufa: Universitatea Agrară de Stat Bashkir, 2015. – 28 p.
- Lapte și produse de prelucrare a laptelui. Metode de analiză microbiologică: GOST R 53430-2009. – Aprobat și pus în aplicare prin Ordinul Agenției Federale pentru Reglementare Tehnică și Metrologie din 27 noiembrie 2009 Nr. 520-st. – M.: Standartinform, 2010.
STYLAB oferă șervețele de testare, substraturi de testare și ștampile microbiologice pentru determinarea TMC și QMAFAnM în diferite probe.
Numărul total de microbi (TMC) este un indicator pentru evaluarea încărcăturii bacteriene totale. Acesta este unul dintre principalii indicatori determinați în timpul studiilor microbiologice sanitare. Aceasta este cantitatea totală de tot conținutul în 1 ml sau 1 cm 3 de probă. Valoarea sa este exprimată în unități formatoare de colonii: CFU/ml sau CFU/cm3. O unitate formatoare de colonii este un microorganism care formează o colonie în timpul reproducerii.
Se crede că cu cât TMC este mai mare, cu atât este mai probabilă prezența agenților patogeni în obiectul studiat. De fapt, valoarea acestui indicator este influențată și de saprotrofe, care împiedică dezvoltarea microorganismelor patogene, iar TMC se corelează clar doar cu gradul de contaminare a obiectului cu substanțe organice. Cu toate acestea, acesta este un indicator sanitar important, deoarece vă permite să evaluați curățenia și calitatea dezinfectării apei, suprafețelor, echipamentelor și a altor obiecte de mediu.
Organismele mezofile aerobe și anaerobe facultative (CAFAnM) sunt de obicei măsurate în produsele alimentare. Microorganismele aerobe sunt creaturi vii care au nevoie de oxigen pentru a exista. Aerobii facultativi pot trăi și se pot reproduce atât în prezența oxigenului, cât și fără acesta. Uneori, termenul QMAFAnM este folosit ca sinonim pentru OMC. Valoarea sa este exprimată în CFU/g sau CFU/cm3. KMAFAnM vă permite să evaluați condițiile de depozitare și transport a produselor alimentare. GMC și QMAFAnM nu sunt aplicabile pentru evaluarea produselor care au propria microfloră, de exemplu, produse cu acid lactic, bere, kvas etc.
Pentru a determina TMC și QMAFAnM, o probă din concentrația inițială și câteva dintre diluțiile sale succesive de zece ori în apă sau soluție sterilă sunt inoculate pe mediu. Acest lucru este necesar în cazul în care există o mulțime de microorganisme în proba originală și va fi imposibil să distingem coloniile formate de acestea. Pentru a determina QMAFanM, vă recomandăm să utilizați șervețele de testare. TMC poate fi determinat si pe suprafete dure prin amprentare folosind stampile microbiologice.
Prin determinarea TMC, se poate evalua și eficacitatea dezinfectanților. Pentru a face acest lucru, este necesar să folosiți un mediu cu substanțe care le neutralizează efectul, deoarece atunci când eficacitatea lor scade, dezinfectanții nu distrug microorganismele, ci doar le inhibă creșterea. Pe mediile obișnuite, astfel de organisme nu au timp să formeze colonii. Pentru o astfel de evaluare sunt destinate ștampilelor microbiologice.
În Federația Rusă și în țările Uniunii Vamale, parametrii GMC și QMAFAnM nu trebuie să depășească cei stabiliți de CU TR „Cu privire la siguranța produselor alimentare” și alte reglementări tehnice ale Uniunii Vamale. Informațiile legislative actuale pot fi găsite pe site
Natural apă din diverse surse conține întotdeauna o anumită cantitate de compuși chimici, diverse microflore, ouă de helminți, viruși, care pot provoca intoxicații, precum și boli de natură epidemiologică și endemică. Apa este una dintre căile de transmitere a agenților patogeni, în special a celor infecțioși. Infecțiile transmise în principal prin apă se numesc transmise prin apă. Acestea includ: febra tifoidă, dizenteria, salmoneloza, holera, hepatita infecțioasă, poliomielita, tularemia, leptospiroza. Bolile pielii si ale mucoaselor (trahom, scabie, boli fungice, conjunctivita adenovirala) se transmit prin apa. Apa poate juca, de asemenea, un rol important în transmiterea agenților patogeni ai unui număr de infecții zoonotice, în principal în rândul animalelor (morva, febra aftoasă, antrax, salmoneloză). Contaminarea apei de către microbi patogeni are loc în mai multe moduri. Cea mai comună dintre ele este deversarea apelor uzate neepurate în corpurile de apă, în special din spitalele de boli infecțioase, spitalele veterinare, întreprinderile industriale care prelucrează materii prime animale și întreprinderile de băi și spălătorie. Contaminarea cu fecale a corpurilor de apă, în special a fântânilor, poate fi cauzată și de apele de suprafață în perioadele de ploi abundente și de topire a zăpezii, precum și de apa din sol dacă în acestea pătrund ape reziduale din canale. Cu o alimentare centrală cu apă, devine posibilă poluarea apei nu numai în punctul de captare a apei, ci și în structurile de cap, precum și în rețeaua de distribuție a apei, cel mai adesea în cazurile de scurgere a conductelor de apă și alte accidente sau racordarea sistemelor tehnice de alimentare cu apă la sistemele de alimentare cu apă potabilă. Rezervoarele pot fi poluate și de secrețiile animalelor sălbatice, în principal rozătoarelor, care, cu urina și fecalele, pot elibera agenți patogeni în apă, de exemplu, boli precum tularemia și leptospiroza. Apa contaminată cu microbi patogeni poate provoca boli în masă (epidemii). În cazul în care apa din bazinele artificiale nu este suficient de purificată și dezinfectată, aceasta poate fi și transmițătoare a unui număr de boli infecțioase. Apa contaminată conține adesea stafilococi, streptococi, agenți patogeni ai dizenteriei, poliomielita etc.
Indicatori ai poluării bacteriologice a apei:
Numărul microbian al apei – numarul total de microbi continuti in 1 ml apa;
Titrul de Escherichia coli – cel mai mic volum de apă în care este detectată o E. coli;
indicele E. coli – numărul de E. coli în 1 litru de apă.
Numărul microbian al apei arată cât de favorabile sau nefavorabile sunt condițiile pentru viața microbilor. În mod normal, 1 ml de apă de la robinet nu trebuie să conțină mai mult de 100 de microbi, iar 1 ml de apă de puț nu trebuie să conțină mai mult de 1000 de microbi.
E. coli, întâlnită în mod obișnuit în intestinul gros al oamenilor și animalelor, este un indicator al contaminării recente a apei cu excrementele animale și umane. În conformitate cu standardele de igienă, titrul de E. coli pentru apa potabilă de la robinet este setat la cel puțin 300 ml. Indexul E. coli - 3 (prezența a nu mai mult de 3 E. coli la 100 ml apă). Pentru apa de puț, titrul de E. coli nu trebuie să fie mai mare de 100.
Un indicator igienic al calității apei este, de asemenea, prezența ouălor de helminți în ea. Nu ar trebui să existe ouă de helminți în apa de băut și apă în piscinele interioare.
Flora și fauna apei. Nu permite prezența organismelor acvatice vizibile pentru ochi în apa de băut.
Surse de alimentare cu apă. Principalele surse de alimentare cu apă sunt rezervoarele închise (apele subterane) și lacurile deschise, iazurile, lacurile de acumulare).
Indicatori ai calității sursei de alimentare centralizată cu apă potabilă menajeră.
| Indicatori definiți | Clasa I | clasa a II-a | clasa a 3-a |
| Izvoare subterane | |||
| Turbiditate, mg/dm³max | 1,5 | 1,5 | 10 |
| Culoare, absolvent, nu mai mult | 20 | 20 | 50 |
| Valoarea hidrogenului (pH) | 6-9 | 6-9 | 6-9 |
| Fier, mg/dm³ nu mai mult | 0,3 | 10 | 20 |
| Mangan, mg/dm³ | 0,1 | 1 | |
| Hidrogen sulfurat.mg/dm³ | absenta | 3 | 10 |
| Fluor, mg/dm³ | 1,5-0,7 | 1,5-0,7 | 5 |
| Numărul de bacterii coli în 1 dm³ | 3 | 100 | 1000 |
| Surse de apă de suprafață | |||
| Turbiditate | 20 | 1500 | 10000 |
| Chroma | 35 | 120 | 200 |
| Miros la 20° și 60° mai mult, puncte | 2 | 3 | 4 |
| Valoarea pH-ului | 6,5-8,5 | 6,5-8,5 | 6,5-8,5 |
| Fier | 1 | 3 | 5 |
| Mangan | 0,1 | 1 | 2 |
| DBO totală, mg oxigen/dm³s | 3 | 5 | 7 |
| Numărul de Escherichia coli cu lactoză pozitivă în dm³ de apă | 1000 | 10000 | 50000 |
Purificarea și dezinfecția apei:
Prima etapă este purificarea apei din particulele în suspensie prin decantare în rezervoare speciale de decantare (orizontale și verticale) și filtrare. Pentru a accelera, se folosește coagularea - purificarea apei cu ajutorul unor compuși chimici speciali - coagulanți (sulfat de aluminiu - alumină), reacţionează cu sărurile de calciu și magneziu, formând cu ele hidrați sub formă de fulgi care se depun pe fundul instalațiilor de tratare. .
A doua etapă este filtrarea. După coagulare, apa este filtrată. Filtre: rezervoare dreptunghiulare cu o suprafață de 50-100 m², cu nisip de râu de 0,6-1 m înălțime, sub care se află un strat de pietriș și conducte de drenaj pentru scurgerea apei filtrate. După 8-12 ore, filtrul se spală cu un flux invers de apă.
A treia etapă este dezinfecția. La noi, aceasta este clorarea cu clor gazos. Aceasta este una dintre cele mai vechi, mai ieftine, simple și destul de fiabile metode de dezinfecție a apei. Se mai folosesc ozonarea și tratamentul cu lumină UV. Ozonarea îmbunătățește gustul apei și proprietățile organoleptice ale apei, dar este costisitoare, necesită echipamente complexe și costisitoare și un control atent
