Общее микробное число питьевой воды. Микробиологические исследования воды. Стандартный микробиологический анализ
При этом методе анализа воды определенное количество воды пропускается через специальную мембрану с размером пор порядка 0.45 мкм. В результате, на поверхности мембраны остаются все находящиеся в воде бактерии. После чего мембрану с бактериями помещают на определенное время в специальную питательную среду при температуре 30-37 оС. Во время этого периода, называемого инкубационным, бактерии получают возможность размножиться и образовать хорошо различимые колонии, которые уже легко поддаются подсчету. В результате можно наблюдать такую: Или даже такую картину:  Так как такой метод анализа воды предполагает только определение общего числа колонии — образующих бактерий разных типов, то по его результатам нельзя однозначно судить о присутствии в воде патогенных микробов. Однако, высокое микробное число свидетельствует об общей бактериологической загрязненности воды и о высокой вероятности наличия патогенных организмов.
|
При анализе воды надо контролировать не только содержание токсичных химических веществ, но и количество микроорганизмов, характеризующих бактериологическое загрязнение питьевой воды ОМЧ-общее микробное число.В воде централизованного водоснабжения это число не должно превышать 50 КОЕ/мл, а в колодцах, скважинах — не более 100 КОЕ/мл
Санитарно-микробиологическос исследование воды проводится в плановом
порядке с целью текущего надзора, а также по специальным эпидемиологичес-
ким показаниям. Основными объектами такого исследования являются:
— питьевая вода центрального водоснабжения (водопроводная вода);
— питьевая вода нецентрализованного водоснабжения;
— вода поверхностных и подземных водоисточников;
— сточные воды;
— вода прибрежных зон морей;
— вода плавательных бассейнов.
Основными показателями оценки микробиологического состояния питьевой воды согласно действующим нормативным документам являются:
1. Общее микробное число (ОМЧ) — количество мезофильных бактерий в 1 мл волы.
Коли титр
— наименьший объем воды (в мл), в котором обнаружена хотя бы одна живая
микробная клетка, относящаяся к БГКП.
Индекс БГКП
— количество БГКП в 1 л воды.
3. Количество спор сульфитредуцирующих клостридий в 20 мл воды.
4. Число колифагов в 100 мл воды.
Определение ОМЧ позволяет оценить уровень микробиологического загрязнения питьевой воды. Этот показатель является незаменимым для срочного обнаружения массивного микробного загрязнения.
Общее микробное число — это число мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов, способных образовывать на питательном агаре при гемперазуре 37 °С и течение 24 ч колонии, видимые при двукратном увеличении.
При определении общего микробного числа 1мл исследуемой воды вносят в стерильную чашку Петри и заливают 10-12 мл теплого (44 °С) расплавленного питательного агара. Среду аккуратно перемешивают с водой, равномерно и
без пузырьков воздуха распределяя по дну чашки, после чего закрывают крышкой и оставляют до застывания. Посевы инкубируют в термостате при 37 °С в течение 24 часов. Подсчитывают общее количество колоний, выросших в обеих чашках, и определяют среднее значение. Окончательный результат выражают числом колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1 мл исследуемой воды. В 1 мл питьевой воды должно быть не более 50 КОЕ
Определение БГКП
При этом определяют общие колиформные бактерии — ОКБ и термотолерантные колиформные бактерии — ТКБ.
ОКБ – грамамотрицатсльные, не образующие спор палочки, ферментирующие лактозу до кислоты и газа при температуре 37°С в течение 24 48 часов. ТКБ входят в число ОКБ, облажают их признаками, но ферментирую при 44°С.Для определения энтеробактерий – метод мебранных фильтров или титрационный.
Микробное число — основными критериями оценки микробиологического состояния питьевой воды, исходя из действующих нормативных документов, является ОМЧ (общее микробное число), которое характеризует количество аэробных и анаэробных бактерий в одном миллилитре воды, образующихся за сутки при температуре 37 градусов, в питательной среде.
Качественные показатели питьевой воды систем водоснабжения.
Данный показатель является фактически незаменимым для быстрого обнаружения массового микробного загрязнения.
Для определения общего микробного числа один миллилитр исследуемой воды вносят в стерильную чашку Петри, затем заливают 10-15 мл тёплого (около 44 °С) питательного агара в расплавленном виде. Среду аккуратно смешивают с водой, равномерно и без воздушных пузырьков воздуха распределяют по дну чашки, после этого закрывают крышкой и оставляют в чашке Петри до застывания. Тоже самое проделывают в другой чашке. Посев в термостате инкубируют при температуре 37 °С в течение суток. Затем при двукратном увеличении под микроскопом подсчитывают общее количество колоний, выросших в двух чашках, и определяют среднее значение. В 1 мл питьевой воды не должно быть более 50 КОЕ.
(основной метод)
Метод основан на фильтрации определенного объема воды (300мл) через мембранные фильтры, выращивании посевов на дифференциально-диагностической среде с лактозой (Эндо) и последующей идентификации колоний по культуральным и биохимическим признакам.
Мембранные фильтры подготовленные к анализу (кипячёные или стерилизованные другим способом), помещают стерильным пинцетом в воронку фильтровального аппарата. В воронку прибора наливают отмеренный объем воды и создают вакуум. После фильтрования фильтр снимают и, не переворачивая, кладут на поверхность питательной среды Эндо.
На одну чашку можно поместить 3 фильтра. При исследовании питьевой воды фильтруют 3 объема по 100 мл. при анализе воды неизвестного качества целесообразно фильтровать другие объемы воды для получения изолированных колоний на фильтре (10,40, 100 и 150 мл).
Чашки с фильтрами инкубируют вверх дном в термостате при t 37оС в течение 24 часов.
Если на фильтрах нет роста или выросли нетипичные плёнчатые, плесневые, расплывчатые колонии, выдают отрицательный результат. ОКБ и ТКБ в 100 мл исследованной воды отсутствуют.
При росте на фильтрах типичных изолированных лактозоположительных (темно-красных с отпечатками на обратной стороне фильтра) колоний, подсчитывают их число и приступают к подтверждению их принадлежности к ОКБ и ТКБ.
Проводят микроскопию мазков из 3-4 колоний, окрашенных по Граму (учитывают грамотрицательные);
Определяют наличие оксидазы (учитывают оксидазоотрицательные, т.к. оксидазоположительные грамотрицательные палочки не относятся к энтеробактериям, а могут быть, например, псевдомонадами);
Определяют ферментацию лактозы до кислоты и газа при температуре 37оС, что важно для слабоокрашенных колоний и отношения их к ОКБ, и температуре 44± 0,5оС, чтобы решить вопрос об их принадлежности к ТКБ.
Постановка оксидазного теста
На бумагу, смоченную 1% спиртовым раствором α-нафтола и 1% водным раствором диметилфенилендиамина, наносят платиновой петлей или стеклянной палочкой часть окрашенной колонии. реакцию считают положительной, если в течение 1 минуты, максимум 4-х появляется синее или фиолетовое окрашивание. Оксидазоположительные колонии не учитывают и дальнейшему исследованию не подвергают.
Можно переносить фильтр с колониями на бумагу смоченную реактивом. Можно использовать готовые бумажные системы (СИБы), смоченные дистиллированной водой.
На способность ферментировать лактозу испытывают части колоний грамотрицательных оксидазоотрицательных бактерий. При этом используется полужидкая среда с лактозой и индикатором рН. Посев производится уколом до дна в 2 пробирки. Одна инкубируется при температуре 37±1оС 24-48 часов для подтверждения отношения к ОКБ, другая при температуре 44± 0,5оС 24 часа, возможен учет через 4-6 часов, для подтверждения наличия ТКБ.
При наложении колоний на фильтре, производится их рассев, затем полученные изолированные колонии идентифицируются. Колонии учитывают как ОКБ – если они красные на Эндо, содержат грамотрицательные оксидазоотрицательные палочки, разлагающие лактозу при температуре 37 оС до кислоты и газа. Колонии учитывают как ТКБ, если они содержат грамотрицательные оксидазоотрицательные палочки, ферментирующие лактозу при температуре 44 оС до кислоты и газа (схема № 2).
СХЕМА № 2
Дата публикования: 2014-11-02; Прочитано: 1811 | Нарушение авторского права страницы
studopedia.org — Студопедия.Орг — 2014-2018 год.(0.001 с)…
Общее микробное число
| При этом методе анализа воды определенное количество воды пропускается через специальную мембрану с размером пор порядка 0.45 мкм. В результате, на поверхности мембраны остаются все находящиеся в воде бактерии. После чего мембрану с бактериями помещают на определенное время в специальную питательную среду при температуре 30-37 оС. Во время этого периода, называемого инкубационным, бактерии получают возможность размножиться и образовать хорошо различимые колонии, которые уже легко поддаются подсчету. В результате можно наблюдать такую: Или даже такую картину: Так как такой метод анализа воды предполагает только определение общего числа колонии — образующих бактерий разных типов, то по его результатам нельзя однозначно судить о присутствии в воде патогенных микробов. Однако, высокое микробное число свидетельствует об общей бактериологической загрязненности воды и о высокой вероятности наличия патогенных организмов.
|
При анализе воды надо контролировать не только содержание токсичных химических веществ, но и количество микроорганизмов, характеризующих бактериологическое загрязнение питьевой воды ОМЧ-общее микробное число.В воде централизованного водоснабжения это число не должно превышать 50 КОЕ/мл, а в колодцах, скважинах — не более 100 КОЕ/мл
Санитарно-микробиологическос исследование воды проводится в плановом
порядке с целью текущего надзора, а также по специальным эпидемиологичес-
ким показаниям. Основными объектами такого исследования являются:
— питьевая вода центрального водоснабжения (водопроводная вода);
— питьевая вода нецентрализованного водоснабжения;
— вода поверхностных и подземных водоисточников;
— сточные воды;
— вода прибрежных зон морей;
— вода плавательных бассейнов.
Основными показателями оценки микробиологического состояния питьевой воды согласно действующим нормативным документам являются:
1. Общее микробное число (ОМЧ) — количество мезофильных бактерий в 1 мл волы.
Коли титр
— наименьший объем воды (в мл), в котором обнаружена хотя бы одна живая
микробная клетка, относящаяся к БГКП.
Индекс БГКП
— количество БГКП в 1 л воды.
3. Количество спор сульфитредуцирующих клостридий в 20 мл воды.
4. Число колифагов в 100 мл воды.
Определение ОМЧ позволяет оценить уровень микробиологического загрязнения питьевой воды. Этот показатель является незаменимым для срочного обнаружения массивного микробного загрязнения.
Общее микробное число — это число мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов, способных образовывать на питательном агаре при гемперазуре 37 °С и течение 24 ч колонии, видимые при двукратном увеличении.
При определении общего микробного числа 1мл исследуемой воды вносят в стерильную чашку Петри и заливают 10-12 мл теплого (44 °С) расплавленного питательного агара. Среду аккуратно перемешивают с водой, равномерно и
без пузырьков воздуха распределяя по дну чашки, после чего закрывают крышкой и оставляют до застывания. Посевы инкубируют в термостате при 37 °С в течение 24 часов. Подсчитывают общее количество колоний, выросших в обеих чашках, и определяют среднее значение. Окончательный результат выражают числом колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1 мл исследуемой воды. В 1 мл питьевой воды должно быть не более 50 КОЕ
Определение БГКП
При этом определяют общие колиформные бактерии — ОКБ и термотолерантные колиформные бактерии — ТКБ.
ОКБ – грамамотрицатсльные, не образующие спор палочки, ферментирующие лактозу до кислоты и газа при температуре 37°С в течение 24 48 часов. ТКБ входят в число ОКБ, облажают их признаками, но ферментирую при 44°С.Для определения энтеробактерий – метод мебранных фильтров или титрационный.
Микробное число — основными критериями оценки микробиологического состояния питьевой воды, исходя из действующих нормативных документов, является ОМЧ (общее микробное число), которое характеризует количество аэробных и анаэробных бактерий в одном миллилитре воды, образующихся за сутки при температуре 37 градусов, в питательной среде. Данный показатель является фактически незаменимым для быстрого обнаружения массового микробного загрязнения.
Для определения общего микробного числа один миллилитр исследуемой воды вносят в стерильную чашку Петри, затем заливают 10-15 мл тёплого (около 44 °С) питательного агара в расплавленном виде. Среду аккуратно смешивают с водой, равномерно и без воздушных пузырьков воздуха распределяют по дну чашки, после этого закрывают крышкой и оставляют в чашке Петри до застывания.
Принципы нормирования питьевой воды
Тоже самое проделывают в другой чашке. Посев в термостате инкубируют при температуре 37 °С в течение суток. Затем при двукратном увеличении под микроскопом подсчитывают общее количество колоний, выросших в двух чашках, и определяют среднее значение. В 1 мл питьевой воды не должно быть более 50 КОЕ.
Цель работы: изучение методов оценки санитарнобактериологического состояния питьевой воды и воды из естественных водоемов.
Вода, используемая на предприятиях пищевой промышленности, должна отвечать требованиям, предъявляемым к питьевой воде действующими нормативными документами. Безопасность воды в эпидемиологическом отношении определяют по общему числу микроорганизмов и количеству бактерий группы кишечных палочек в ее определенном объеме.
Качество воды централизованных систем питьевого водоснабжения определяют в соответствии с санитарными правилами и нормами. Питьевая вода должна быть безопасна в эпидемиологическом и радиационном отношениях, безопасна по химическому составу и иметь благоприятные органолептические свойства (табл. 12.1).
Показатели
* БОЕ - бляшкообразующие единицы.
12.1. Отбор проб и подготовка их к анализу
Воду для санитарно-бактериологического контроля отбирают в количестве 500 см 3 в бутылки, предварительно простерилизованные в бумажных пакетах, с ватно-марлевой пробкой, покрытой сверху бумажным колпачком.
Перед отбором пробы кран или край трубы обжигают зажженным ватным тампоном, пропитанным спиртом. Открывают кран и в течение 10-15 мин воду спускают, затем производят отбор пробы. Вода подлежит анализу не позже чем через 2 ч после отбора.
Пробы воды из открытых водоемов - колодцев, бассейнов, рек, озер - отбирают с помощью батометров, представляющих собой металлический каркас с массивным свинцовым дном - грузилом. В металлический каркас вставлена бутылка. Батометр погружают на заданную глубину и открывают бутылку, потягивая за веревку, привязанную к пробке. После наполнения бутылки батометр извлекают и закрывают ее стерильной пробкой.
Пробы хлорированной воды берут во флаконы с дехлоратором, так как под действием хлора микробы в воде погибают. В качестве дехлоратора используют серноватистый натрий из расчета 10 мг на 500 см исследуемой воды.
К отобранным пробам воды прилагают сопроводительный документ с указанием соответствующих данных. Доставку проб питьевой воды осуществляют в контейнерах-холодильниках при температуре от 4 до 10 °С.
12.2. Определение общего микробного числа воды
Общее микробное число (ОМЧ) - это количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов, образующих колонии на мясопептонном агаре при посеве 1 см 3 воды с последующей инкубацией посевов при температуре 37±0,5 °С в течение 48 ч. ОМЧ должно быть не более 50 КОЕ/см 3 .
В зависимости от степени предполагаемого загрязнения производят посев не менее двух различных объемов воды, выбранных с таким расчетом, чтобы на чашках вырастало от 30 до 300 колоний. Водопроводную и артезианскую воду засевают в неразведенном виде по 1 см 3 . При бактериологическом исследовании загрязненных вод делают посевы разведенной воды. Разведения готовят так, как указано в разделе 8.3.
Из исследуемого образца и из пробирок с его разведениями в соответствии со степенью предполагаемого микробного загрязнения отбирают по 1 см 3 , вносят в стерильные чашки Петри и заливают 10-12 см расплавленного и остуженного до температуры 45 °С мясопептонного агара. Круговыми движениями руки, вращая чашки по горизонтальной поверхности стола, распределяют их содержимое равномерным слоем по всей площади дна. После застывания агара чашки с посевами помещают на 24 ч в термостат при температуре 37 °С. После инкубации подсчитывают число выросших колоний.
Определение микробного числа указанным методом позволяет выявить лишь мезофильные аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы.
12.3. Определение содержания колиформных бактерий в воде
С эпидемиологической точки зрения особенно важным является обнаружение в воде патогенных микроорганизмов - возбудителей кишечных инфекций (брюшного тифа, дизентерии, холеры и др.) Однако в связи с большой трудностью обнаружения патогенных микроорганизмов при бактериологических анализах ограничиваются определением так называемых санитарно-показательных микроорганизмов (СПМ). К санитарно-показательным относят микроорганизмы, постоянно находящиеся в естественных полостях человека или животных. Присутствие СПМ в различных объектах внешней среды является индикатором их загрязнения человеком. Чем больше СПМ во внешней среде, тем более вероятным становится присутствие специфических возбудителей инфекционных заболеваний.
В качестве СПМ наибольшее значение имеют бактерии группы кишечных палочек (БГКП). К группе кишечных палочек относят колиформные бактерии родов Escherichia, Enterobacter, Citrobacter, Klebsiella, Serratia.
При определении количества СПМ в воде используют следующие характеристики:
. коли-титр - наименьший объем воды, в котором обнаружена одна кишечная палочка. Для питьевой воды, прошедшей очистку, титр кишечной палочки должен быть не менее 300 см 3 ;
. коли-индекс - количество кишечных палочек в 1 дм 3 воды. Коли-индекс для питьевой воды должен быть не более 3.
Колиформные бактерии определяют в воде методом мембранных фильтров или бродильным методом.
Бродильный метод. Сущность бродильного метода заключается в посеве определенных объемов исследуемой воды, инкубации
посевов при температуре 37 °С в средах накопления с последующим высевом на среду Эндо, дифференциацией выросших колоний и определением наиболее вероятного числа БГКП в 1 дм 3 воды.
При исследовании воды централизованного водоснабжения исследуемый материал дважды засевают в три объема: 100, 10 и 1 см 3 . Для исследования речной, озерной, прудовой воды готовят десятикратные разведения 1:10, 1:100, 1:1000 и засевают еще 10 см 3 и 1 см 3 без разведения. Посев воды производят в бродильные сосуды (колбы, бутылки, пробирки с поплавками), заполненные глюкозопептонной средой Эйкмана. Посевы инкубируют в термостате при температуре 37 °С в течение 24 ч.
а) при отсутствии газообразования и изменения цвета среды дают отрицательный ответ на наличие БГКП в исследуемом объеме воды, дающим право закончить исследование через 24 ч;
б) при образовании кислоты и газа производится высев материала из бродильных сосудов на среду Эндо. Высев делается бактериологической петлей густым штрихом для получения изолированных колоний. Чашки с посевами инкубируют при температуре 37 °С в течение 24 ч. После инкубации посевы просматривают. Отсутствие на среде Эндо характерных для кишечных палочек колоний дает основание на выдачу отрицательного ответа и окончание исследования;
в) при обнаружении на среде Эндо лактозоположительных темно-красных колоний, с металлическим блеском или без него, необходимо установить принадлежность выросших микроорганизмов к семейству кишечных бактерий. С этой целью производится микроскопирование препарата из колоний и постановка оксидазного теста.
Оксидазный тест предложен для дифференциации бактерий семейства Enterobacteriaceae от грамотрицательных бактерий семейства Pseudomonodaceae и других водных сапрофитов, которые, в отличие от кишечных бактерий, вырабатывают фермент оксидазу.
Для постановки оксидазного теста со среды Эндо снимают петлей по 2-3 колонии каждого типа. Микробную массу наносят штрихом на фильтровальную бумагу, смоченную специальным реактивом (30 г α-д-нафтола растворяют в 2,5 см 3 этанола, прибавляют 7,5 см 3 дистиллированной воды и 40 мг диметил-парафенилендиамина. Раствор готовят непосредственно перед определением).
При отрицательном результате оксидазного теста бумага при контакте с колонией цвета не меняет. Если же бумага синеет в течение 1 мин при контакте с колонией, то оксидазный тест считают положительным.
Наличие в препарате грамотрицательных неспорообразующих палочек, не обладающих оксидазной активностью, позволяет немедленно дать ответ о наличии в воде БГКП.
При обнаружении на среде Эндо розовых и бесцветных колоний ведут подсчет и пересевают 2-3 изолированные колонии каждого типа в глюкозо-пептонную среду Эйкмана. Посевы инкубируют при температуре 37 °С в течение 3-4 ч. При образовании кислоты (изменение цвета среды) и газа, накапливающегося в поплавке, результат считается положительным, при отсутствии кислото- и газообразования - отрицательным.
После проведения анализа записывают в лабораторный журнал окончательные результаты (положительные и отрицательные) по каждому засеянному объему и определяют коли-титр и коли-индекс.
Метод мембранных фильтров. Сущность метода заключается в концентрировании бактерий из определенного объема воды на мембранных фильтрах с последующим выращиванием их на среде Эндо при температуре 37 °С, дифференцированием выросших колоний и подсчетом количества БГКП в 1 см 3 воды.
Подготовка мембранных фильтров. Для фильтрования воды отбирают мембранные фильтры № 3, помещают их в подогретую до температуры 80 °С дистиллированную воду и ставят на небольшой огонь для кипячения. Кипячение проводят трижды по 10 мин. После первого и второго кипячения воду сливают, а после третьего фильтры оставляют в воде до употребления.
Подготовка фильтровального аппарата. Фильтровальный аппарат стерилизуют в автоклаве или протирают ватным тампоном, смоченным в спирте, и обжигают в целях стерилизации. На столик фильтровального аппарата стерильным пинцетом помещают мембранный фильтр. Во избежание повреждения фильтра под него подкладывают кружок стерильной фильтровальной бумаги. На фильтровальный столик с положенными на него фильтрами устанавливают и закрепляют верхнюю часть прибора - воронку (рис. 12.1).
Рис. 12.1. Определение количества микроорганизмов методом мембранных фильтров
Фильтрование воды и выращивание микроорганизмов. В воронку фильтровального аппарата стерильно наливают исследуемый объем воды и с помощью водоструйного насоса создают вакуум в приемном сосуде. При анализе питьевой воды, поступающей в водопроводную сеть, необходимо брать объем не менее 333 см 3 . По окончании фильтрования мембранный фильтр профламбированным пинцетом переносят на поверхность питательной среды Эндо в чашки Петри. В настоящее время выпускают фильтры, пропитанные соответствующими питательными средами. Посевы инкубируют в термостате при температуре 37 °С в течение 18-24 ч.
Обработка результатов анализа. По окончании инкубации посевы просматривают и делают следующие выводы:
а) отсутствие микробного роста на фильтрах или обнаружение на них колоний, не характерных для БГКП, позволяет закончить исследования на этом этапе анализа с выдачей отрицательного результата на присутствие БГКП в анализируемом объеме воды;
б) при обнаружении на фильтре колоний, характерных для БГКП, исследование продолжают. Из нескольких колоний каждого типа готовят мазки, окрашивают их по Граму и микроскопируют. Отсутствие в мазках мелких грамотрицательных неспороносных палочек является основанием для прекращения анализа с выдачей отрицательного результата на присутствие БГКП в исследуемом объеме воды;
в) при наличии в мазках грамотрицательных палочек, морфологически сходных с кишечными, ставится оксидазная проба. При обнаружении на мембранных фильтрах однотипных лактозоположительных колоний (темно-красных с металлическим блеском или без него), не вырабатывающих оксидазы, анализ воды на этом этапе заканчивают и подсчитывают число выросших на мембранном фильтре колоний кишечных палочек. Результат выражают в виде коли- индекса в пересчете на 1 дм 3 воды;
г) при обнаружении на мембранных фильтрах розовых и бесцветных колоний подсчитывают их число и пересевают 2-3 изолированные колонии каждого типа в глюкозо-пептонную среду Эйкмана. После инкубации в течение 3-4 ч при температуре 37 °С отмечают изменение цвета среды за счет образования кислоты и накопления газа в поплавке. В этом случае результат считается положительным. Если изменений в среде нет, то дают отрицательный результат на присутствие БГКП.
Пример определения колииндекса: профильтровано три объема воды по 100 см 3 . На первом и втором фильтрах выросло по три колонии, на третьем - девять колоний. Всего выросло пятнадцать колоний. Таким образом, колииндекс исследуемого образца воды равен: (1000 х 15):300 = 50. Колииндекс переводится в колититр следующим образом: 1000:50 = 20.
Контрольные вопросы
1. Какие Вы знаете показатели эпидемиологической безопасности питьевой воды?
2. Что такое общее микробное число, колититр и колииндекс?
3. Какие роды микроорганизмов входят в БГКП?
4. Какими методами определяют колиформные бактерии?
5. Каковы основные критерии, по которым устанавливают присутствие колиформных бактерий в питьевой воде?
6. С какой целью проводят тест на оксидазу?
Сырое молоко - молоко, не подвергавшееся термической обработке при температуре более чем 40ºС или обработке, в результате которой изменяются его составные части.
Сырое молоко может содержать опасные микроорганизмы, которые могут вызывать инфекционные болезни и пищевые отравления. Сырое молоко занимает первое место среди продуктов, употребление которых связано с риском получить серьезное заболевание.
Сорт молока зависит от количеств МАФАнМ в 1 мл молока, по санитарным правилам и нормам (СанПиН 2.3.2.1078-01) сырое молоко подразделяют на:
- на молоко сырое, высший сорт - не более 300 тыс. бактерий в 1 мл;
- на молоко сырое, I сорт - не более 500 тыс. бактерий в 1 мл;
- на молоко сырое, II сорт - не более 4 млн бактерий в 1 мл.
Цель исследования: изучить уровень микроорганизмов в сыром молоке. В связи с этим, была поставлена задача: определить уровень общего микробного числа в молоке, а именно КМАФАнМ (количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов).
Материалом для исследования служило сырое молоко, взятое от коровы по кличке «Снежинка», симментальской породы находящейся в стационаре БашГАУ.
Рисунок 1 . Образец исследуемого молока.
Определение КМАФАнМ проводила согласно действующего ГОСТ Р 53430-2009. Метод основан на способности мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов размножаться на питательной среде (МПА) при температуре 30±1°С в течение 72 ч.
Из сырого молока готовила последовательные десятикратные разведения, т.е. 1 мл сырого молока вносила в пробирку с 9 мл стерильной воды для получения первого разведения 1:10 (10‾¹). Из первого разведения 1 мл перенесла во вторую пробирку с 9 мл стерильной воды – получилось второе разведение 1:100 (10‾²) и так далее до разведения 10 -5 .
Выделение КМАФАнМ из проб сырого молока проводила путем посева трех последних разведений (10 -3 , 10 -4 , 10 -5) (таблица 1).
Таблица 1 .
Схема посевов на питательные среды
|
Питательная среда |
Выделяемые микроорганизмы |
Разведения |
||||
По 1 мл каждого разведения внесла в одну чашку Петри, с заранее маркированной крышкой, и залила 14±1 мл расплавленным и охлажденным до температуры 40-45°С агаром. Сразу после заливки агара содержимое чашки Петри тщательно перемешала путем легкого вращательного покачивания для равномерного распределения посевного материала. После застывания агара чашки Петри перевернула крышками вниз и поместила в термостат при 30±1°С на 72 часа.
Количество выросших колоний подсчитала в каждой чашке, умножила на степень (формула 1).
Формула расчета: Х= n*10 m
где n - количество колоний, подсчитанных на чашке Петри;
m - число десятикратных разведений.
Получила следующее среднее значение (таблица 2).
Таблица 2.
Количество выросших колоний
Из таблицы 2 видно, что в чашке Петри с разведением 10‾ 3 выросло 21 колония, что соответствует 21000 микроорганизмов; в чашке с разведением 10‾ 4 – 13 колоний (130000), а в чашке с разведением 10‾ 5 – 6 колонии (600000). Среднее значение трех показателей составило 250333 (250,333 тыс.) микроорганизмов.
Таким образом, общее микробное число в молоке, а именно количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов в исследуемом молоке составляет 250,333 тыс. По санитарным правилам и нормам (СанПин 2.3.2.1078-01) данное сырое молоко можно отнести к категории «высший сорт», поскольку КМАФАнМ составило менее 300 тыс. бактерий в 1 мл.
Также необходимо отметить, что данное сырое молоко соответствует ГОСТ Р 53430-2009, пригодно для непосредственного потребления, переработки на молочные продукты, отвечает требованиям санитарного состояния содержания животных и гигиены получения молока.
Список литературы :
- Госманов Р.Г. Санитарная микробиология: Учебное пособие. – СПб.: Издательство «Лань», 2010. – 240с.
- Ильясова З. З. Методические указания к практическим занятиям С2.Б.11 Ветеринарная микробиология и микология: Методические указания / З. З. Ильясова. – Уфа: Башкирский ГАУ, 2015. – 28 с.
- Молоко и продукты переработки молока. Методы микробиологического анализа: ГОСТ Р 53430-2009. – Утвержден и введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 27 ноября 2009 г. № 520-ст. – М. : Стандартинформ, 2010.
СТАЙЛАБ предлагает тест-салфетки, тест-подложки и микробиологические штампы для определения ОМЧ и КМАФАнМ в различных пробах.
Общее микробное число (ОМЧ) является показателем для оценки общей бактериальной обсемененности. Это один из основных показателей, определяемых в ходе санитарно-микробиологических исследований. Это общее количество всех , находящихся в 1 мл или 1 см 3 пробы. Его значение выражают в колониеобразующих единицах: КОЕ/мл или КОЕ/см 3 . Колониеобразующая единица - это микроорганизм, образующий колонию в ходе размножения.
Считается, что чем выше ОМЧ, тем вероятнее присутствие в исследуемом объекте патогенов. В действительности на величину этого показателя влияют также сапротрофы, которые препятствуют развитию патогенных микроорганизмов, и ОМЧ однозначно соотносится лишь со степенью загрязненности объекта органическими веществами. Однако это важный санитарный показатель, поскольку он позволяет оценить чистоту и качество дезинфекции воды, поверхностей, оборудования и других объектов окружающей среды.
В пищевых продуктах обычно определяют количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных организмов (КМАФАнМ). Аэробные микроорганизмы - это живые существа, которым для существования необходим кислород. Факультативные аэробы могут жить и размножаться как в присутствии кислорода, так и без него. Иногда термин КМАФАнМ используют в качестве синонима ОМЧ. Его значение выражают в КОЕ/г или КОЕ/см 3 . КМАФАнМ позволяет оценить условия хранения и транспортировки пищевых продуктов. ОМЧ и КМАФАнМ неприменимы для оценки продуктов, обладающих собственной микрофлорой, к примеру, молочнокислых продуктов, пива, кваса и др.
Для определения ОМЧ и КМАФАнМ на среду высевают пробу исходной концентрации и несколько ее последовательных десятикратных разведений в стерильной воде или растворе. Это необходимо на случай, если в исходной пробе очень много микроорганизмов, и различить колонии, образованные ими, будет невозможно. Для определения КМАФанМ рекомендуем использовать тест-салфетки . Определить ОМЧ на твердых поверхностях можно также методом отпечатка с помощью микробиологических штампов.
С помощью определения ОМЧ можно также оценивать эффективность дезинфектантов. Для этого необходимо использовать среду с веществами, нейтрализующими их действие, поскольку при снижении эффективности дезинфектанты не уничтожают микроорганизмы, а лишь угнетают их рост. На обычных средах такие организмы не успевают образовать колонии. Для такой оценки предназначены микробиологические штампы .
В Российской Федерации и странах Таможенного Союза параметры ОМЧ и КМАФАнМ не должны превышать установленных ТР ТС «О безопасности пищевой продукции» и другими техническими регламентами Таможенного Союза. С актуальной законодательной информацией можно ознакомиться на сайте
Природная вода из различных источников всегда содержит некоторое количество химических соединений, разнообразную микрофлору, яйца гельминтов, вирусы, которые могут быть причиной интоксикации, а также заболеваний эпидемиологического и эндемического характера. Вода – один из путей передачи возбудителей заболеваний, в частности инфекционных. Инфекции, предающиеся преимущественно через воду, называются водными. К ним относятся: брюшной тиф, дизентерия, сальмонеллезы, холера, инфекционный гепатит, полиомиелит, туляремия, лептоспирозы. Передаются через воду заболевания кожных покровов и слизистых оболочек (трахома, чесотка, грибковые заболевания, аденовирусные конъюнктивиты). Вода может играть важную роль и в передаче возбудителей ряда зоонозных инфекций, главным образом среди животных (сап, ящур, сибирская язва, сальмонеллез). Загрязнение воды патогенными микробами происходит многими путями. Наиболее распространенный из них – спуск в водоемы неочищенных сточных вод, в частности инфекционных больниц, ветеринарных лечебниц, промышленных предприятий, перерабатывающих животное сырье, банно-прачечных предприятий. Фекальное загрязнение водоемов, в частности колодцев, может вызываться кроме этого поверхностными водами в периоды ливневых дождей и таяния снегов, а также почвенными водами, если в них проникают нечистоты из выгребных ям. При центральном водоснабжении становится возможным загрязнение воды не только в месте водозабора, но и в головных сооружениях, а также в водоразводящей сети, чаще всего в случаях нарушения герметичности водопроводных труб и других аварий или подсоединения технических водопроводов к водопроводам питьевым. Водоемы могут загрязняться и выделениями диких животных, главным образом грызунов, которые с мочой и фекалиями могут выделять в воду возбудителей таких, например болезней как туляремия и лептоспирозы. Вода, загрязненная патогенными микробами, может вызвать массовые заболевания (эпидемии). Вода искусственных бассейнов при недостаточной очистке и обеззараживании может также быть передатчиком ряда инфекционных заболеваний. В загрязненной воде часто присутствуют стафилококки, стрептококки, возбудители дизентерии, полиомиелита и др.
Показатели бактериологического загрязнения воды:
Микробное число воды
– общее количество микробов, содержащихся в 1 мл воды
;
Титр кишечной палочки
– наименьший объем воды, в котором обнаруживается одна кишечная палочка
;
Индекс кишечной палочки
– количество кишечных палочек в 1 л воды
.
Микробное число воды показывает, насколько благоприятны или неблагоприятны условия для жизни микробов. В норме в 1 мл водопроводной воды не должно быть более 100, а в колодезной –более 1000 микробов.
Кишечная палочка, обычно обитающая в толстом кишечнике человека и животных, служит показателем свежего загрязнения воды экскрементами животных и человека. В соответствии с гигиеническими нормами титр кишечной палочки для водопроводной питьевой воды установлен не менее 300 мл. Индекс кишечной палочки - 3 (наличие в 100 мл воды не более 3 кишечных палочек). Для колодезной воды титр кишечной палочки не должен быть более 100.
Гигиеническим показателем качества воды является также наличие в ней яиц гельминтов. В питьевой воде и воде крытых бассейнов яйца гельминтов должны отсутствовать.
Флора и фауна воды. Не допускает содержания в питьевой воде видимых на глаз водных организмов.
Источники водоснабжения. Основные источники водоснабжения – закрытые водоемы (подземные воды) и открытые озера, пруды, водохранилища).
Показатели качества источника централизованного хозяйственно-питьевого водоснабжения.
| Определяемые показатели | 1-й класс | 2-й класс | 3-й класс |
| Подземные источники | |||
| Мутность, мг/дм³не более | 1,5 | 1,5 | 10 |
| Цветность, град, не более | 20 | 20 | 50 |
| Водородный показатель (рН) | 6-9 | 6-9 | 6-9 |
| Железо,мг/дм³не более | 0,3 | 10 | 20 |
| Марганец, мг/дм³ | 0,1 | 1 | |
| Сероводород.мг/дм³ | отсутствие | 3 | 10 |
| Фтор,мг/дм³ | 1,5-0,7 | 1,5-0,7 | 5 |
| Число бактерий группы кишечной палочки в 1 дм³ | 3 | 100 | 1000 |
| Поверхностные источники водоснабжения | |||
| Мутность | 20 | 1500 | 10000 |
| Цветность | 35 | 120 | 200 |
| Запах при 20° и 60° более, баллы | 2 | 3 | 4 |
| Водородный показатель | 6,5-8,5 | 6,5-8,5 | 6,5-8,5 |
| Железо | 1 | 3 | 5 |
| Марганец | 0,1 | 1 | 2 |
| БПК полное, мг по килороду/дм³с | 3 | 5 | 7 |
| Число лактозоположительных кишечных палочек в дм³воды | 1000 | 10000 | 50000 |
Очистка и обеззараживание воды :
Первый этап – очистка воды от взвешенных частиц отстаиванием в специальных отстойниках (горизонтальных и вертикальных) и фильтрацией. Для ускорения используется коагуляция – очистка воды с помощью специальных химических соединений – коагулянтов (сернокислый алюминий – глинозем), он вступает в реакцию с солями кальция и магния, образует с ними гидраты в виде хлопьев, оседающих на дно очистных сооружений.
Второй этап- фильтрация. После коагуляции вода фильтруется. Фильтры: прямоугольные резервуары площадью 50-100 м², с речным песком высотой 0,6-1м, под которым слой гравия и дренажные трубы для отвода профильтрованной воды. После 8-12 часов фильтр промывается обратным током воды.
Третий этап – дезинфекция. В нашей стране – это хлорирование газообразным хлором. Это один из самых старых, дешевых простых и достаточно надежных способов обеззараживания воды. Применяется также озонирование, и обработка УФЛ. Озонирование улучшает вкус воды и органолептические свойства воды, но это дорого, требует сложной и дорогой аппаратуры, тщательного контроля
